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原子力顯微鏡的應用及樣品要求

更新時間:2023-05-31瀏覽:969次

原子力顯微鏡的應用

AFM以其操作方便,對樣品處理要求不高,原子級分率低,樣本可在空氣中成者液體中直接觀察,可檢測的樣品范圍廣等優(yōu)點,贏得了越越廣闊的應用,利用AFM可以觀察生物制品的形態(tài)結構、檢測生物力、觀察品體的三結構及插體的生長等,這勢必會進一步推動生命科學,材料科學的一步發(fā)展。
 
(一)生命科學中的應用
1.用于形態(tài)結構的觀察
 
由于AFM具有光學顯微鏡所不具備的高分辨率,同時又不需掃描電子顯微鏡的嚴格制樣要求。AFM已廣泛地應用于細胞、蛋白質(zhì)、核酸等生物形態(tài)結構的研究。
目前,生物學家們已經(jīng)利用AFM研究活細胞或固定的細胞,如紅細胞、白細胞等,獲得了豐富的信息。對于單個細胞而言,AFM不但能夠提供長度、寬度、高度等形態(tài)方面的信息,而且可以滿足人們對膜上的離子通道、絲狀偽足、細胞間連接等細微結構研究的要求,甚至還可清楚地觀察到膜本身的骨架結枃。這些對于進步研究細胞表面及表面以下結構相互作用很有啟發(fā)性。
 
AFM還可以觀察蛋白質(zhì)的細微結構,測算復合物中蛋白質(zhì)的大小,最早用AFM研究的膜蛋白是 halo bacterium halobim的紫膜上的視紫紅蛋白,得到視紫紅蛋白在膜上呈二維的六角形排列。AFM還比較成功地觀察了肌動蛋白、血纖維蛋白原,膠元蛋白,免應球蛋白等游離蛋白質(zhì)分子,隨著深針技術的不斷改進,觀測到了肌動蛋白分子的螺旋構造,通過AFM對肌動蛋白聚合、解聚、破裂、彈性系數(shù)變化等過程的觀察,進步證實肌動蛋白的網(wǎng)絡結構對于活細胞的穩(wěn)定性起決定作用。
 
2.用于動態(tài)過程的研究
 
AFM可以在生理狀態(tài)下觀察任何活的生命樣品和動態(tài)過程,主要有生物大分子之間的生化反應過程、病毒對細胞的感染過程、蛋白質(zhì)的結晶析出等等,已被廣泛地應用到生物樣品中。
 
觀察生物大分子之間的生化反應過程,對于研究生物的結構與功能有很大的幫助,有很多實驗動態(tài)觀察了DNA復制、轉錄和蛋白質(zhì)的翻譯過程,有些實驗則觀察DNA、RNA與酶結合過程,使人們對這些生化反應有了更進一步的了解,此外,AFM可以清晰地看到RNA聚合酶在DMA模板中運動,這種技術用于更大的分子,將會提高特異治療藥物插人的幾率,那樣很多疑難疾病的治療就成為可能。
 
病毒對細胞的感染是一個很典型的例子,應用AFM已觀察了痘節(jié)病毒感染單個細胞的過程。將痘苗病毒加人培養(yǎng)液后,細胞變得光采軟,在這種狀態(tài)下病毒易于穿過細跑膜。
 
蛋白質(zhì)從溶液中結品析出也是一個分值得關注的領域,人們采用AFM研究溶菌蛋白、刀豆蛋白、TEuvEaLit和過氧化氫測得的情況,這些研究有助于人們更加深入地理解蛋白質(zhì)晶體的生長動力學和成核機理。
 
原子力顯微鏡樣品的要求
原子力顯微鏡研究對象可以是有機固體、聚合物以及生物大分子等,樣品的載體選擇范圍很大,包括云母片、玻璃片、石墨、拋光硅片、二氧化硅和某些生物膜等,其中常用的是新剝離的云母片,主要原因是其非常平整且容易處理。而拋光硅片最好要用濃硫酸與30%雙氧水的7∶3 混合液在90 ℃下煮1h。利用電性能測試時需要導電性能良好的載體,如石墨或鍍有金屬的基片。
 
試樣的厚度,包括試樣臺的厚度,最大為10 mm。如果試樣過重,有時會影響Scanner的動作,請不要放過重的試樣。試樣的大小以不大于試樣臺的大?。ㄖ睆?0 mm)為大致的標準。稍微大一點也沒問題。但是,最大值約為40 mm。如果未固定好就進行測量可能產(chǎn)生移位。請固定好后再測定。

 

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